1樓：青墨雨
第乙個想法就是LR酶壞了，你說換過LR酶，但最好還是做乙個陽性對照（用你以前構建順利的221-X和目標載體），看一下LR酶是否壞了。如有條件，買乙個新的LR酶再做，同時做好對照。
有幾個問題：
1、B-pDONR與目標載體以3:1的質量比配置LR重組體系，重組產物轉化塗板後可見轉殖子數目較少。目標載體抗性是kan抗性嗎？
如果是，以我的經驗，還會有很多沒有進行LR反應的轉殖子存在。如果是不同抗性的。LR反應失敗，就會轉殖子很少，出現的轉殖子是雜菌，或者基因突變的DH5a。
懷疑你是否用錯了抗性板。
2、挑取轉殖子搖菌並提質粒C。你菌P都沒條帶還繼續做轉染了？好奇怪。你可以測一下質粒C，看到底是什麼質粒，裡面的序列是什麼？
如果B-pDONR與目標載體都是對的，抗性篩選也沒有錯，就是LR酶的問題。你能做成BP反應，操作應該沒什麼問題。問題都應該是細節上是不是錯了。
我有構建過乙個基因，pDONR221都進不去，各種嘗試都試過，懷疑是該基因片段有特殊結構，妨礙了BP反應。你的應該不是這種情況。
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側踢時支撐腿外側痠疼，我的經驗是正常表現，我一般第一組的時候比較痠疼，第二組就不疼了。當然了，也有一些小技巧可言改善，通過叉腰緩解穩定。注意叉腰手和側踢的一側一樣，另乙隻手扶著器材或牆。如下圖另外乙個方法，就是改成臥側踢 kmlover 之所以說闊筋膜張肌在這裡是維持平衡的主力，是因為醫學臨床實踐中...
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