1樓：
表達出來的是蛋白質產物，有時候有mrna合成但不一定能正常蛋白質產物。檢查讀碼框對不對是不是完整沒有移碼，載體啟動子型別對不對，菌株是表達菌株嗎？誘導劑做時間和濃度的梯度。
有的型別蛋白在大腸桿菌表達量就是低，小試管誘導過夜取菌液離心沉澱做個western blot鑑定。
2樓：清華老張
這裡扣除表達構建與鑑定錯誤等低階問題。
重組質粒，在連續培養後，如果沒有選擇壓力，質粒會丟失。為了解決這個問題，可以選擇整合策略。
另外，如果表達效率低，可能跑電泳很難發現目標產物。
做表達要參考所用基因構件在所使用宿主的表達水平。如果每公升只有幾百納克，可以算乙個自己的產物濃度。
即使同乙個構件，用不同的培養體系，水平也差異顯著。表達水平由低向高為：試管《三角瓶《發酵罐。補料、通氣、控制酸鹼度等等都缺一不可，可以相差十幾倍甚至上百倍。
3樓：
原因多了
1.用的什麼質粒？用的什麼特異性引物？
pET系列質粒用T7 系列引物，菌落PCR鑑定才準確。如果你用擴增需要表達的基因的引物，大概率是假陽性。
2宿主菌選擇對了麼？
假設你是用E.coli做表達，表達質粒用T7啟動子，的宿主菌裡面溶原化了DE3了麼，T7啟動子沒有T7 RNA聚合酶，可沒辦法開啟轉錄哦
3.基因序列的ORF正確麼？
從第乙個ATG開始到TAA結束，是否因為酶切位點導致移碼突變了呢。有的質粒上的酶切位點切開連上新基因可是會導致新基因移碼的，要看清楚。
4.不是所有蛋白都能成功重組表達，失敗也正常，重要的是找原因。密碼子偏好性，重組蛋白是否需要後修飾，二硫鍵，需要輔助因子幫助摺疊等
4樓：三思
菌落PCR的假陽性非常高，應該挑取多個陽性菌株，加入抗生素小搖之後將菌液送去測序，然後再選取正確的菌株進行重組表達，因為，還有可能存在載體上根本沒有目的基因的情況，當然就不表達了
LR重組失敗可能是什麼原因？
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Wings 戰隊還有重組的可能嗎？
之前就有矛盾，現在更不可能。ti6的時候sylar說wings曾經找過他去打c，他拒絕了，那個時候shadow的表現確實不好，ti6小組賽也是狀態一般，到了淘汰賽慢慢變強，打mvp的劍聖和打eg的哈斯卡把自信心打了出來，決賽神發揮也是天命。ti6結束後的比賽跳刀二冰明顯下滑 跳刀尤其明顯，波士頓ma...