1樓：徐相傑
瀉藥。是這樣的，T載體本身在做的時候，去載體去磷可能本身就沒有去好，這樣即使你沒有片段插進去，也是可以自連的。如果你用的takara的pmd19T之類的T載體，插入片段需要加A尾的，另pmd19T載體本身2700bp,太大的片段是很難連線上去的。
如果你用的是些中國產的T載體，不太需要加A尾，你改下連線時間改下插入片段比例就好了。
2樓：
很明顯目的片段沒有插入成功，但仍然長出菌落的這個現象可能由於以下原因：
1、抗性失效了
2、插入的片段不夠純
3、有雜菌或被實驗室裡其他含有抗性的大腸桿菌汙染了解決方式可以從以下幾個方面考慮：
用的什麼抗生素？
長出來菌落的數量多麼？如果插入片段濃度不大卻長出大量菌落，那可能是汙染或者抗生素失效了
測序結果是怎麼樣的？可以blast一下測序結果看看插入跟你的目的片段的差異情況。
插入片段是多大的？純化過嗎？
連線酶可能失效了。
載體自連了，檢查一下酶切位點對不對。
其實，做乙個陰性和陽性對照就能大概找到原因。
我兩年多沒做實驗了，可能回答不對，僅供參考。慢慢來，你會找到原因的，祝實驗順利。
對於基因工程中的構建表達載體，為什麼可以使用標記基因來確定質粒中含有目的基因？
傲嬌的小崽子 標記基因是可以跟基因表達載體中的目的基因結合，而且有特異性，即只能跟目的基因結合，不能跟基因表達載體中的別的基因片段結合。所以可以通過這種方式來確定質粒中含有目的基因。 小青炒 標記是為了說明轉導。取決於標記表達方式，如果目標基因和標記基因受同一套啟動子和終止子調控，則標記表達可以理解...
大腦是否只是意識的載體？
whitefox 你也可以這樣認為。我們不能單一的將已經認知的事情進行簡單模擬，只是在傳遞意識的過程中，大腦部分起到了載體的功能。如果按照這個理論，身體的每一部分都是意識的載體。而且大腦不僅限於傳遞意識。在我有限的認知裡，是這樣。 江城子 我有一套自己的哲學體系，在我的哲學體系中，大腦就是意識的載體...
知識圖譜的構建流程？
想想想財務自由 你好。我的專欄除了github示例，還有構建知識圖譜常用的工具平台，以及學習資源。望參考。想想想財務自由 Github 知識圖譜的應用示例想想想財務自由 持續更新 知識圖譜相關工具平台整理想想想財務自由 知識圖譜學習資源 持續更新 王大力 知乎首答，想認真寫一寫。本科211，碩士美國...