2019 nCoV的檢測包為什麼必須要用螢光定量PCR而不是普通PCR呢?

時間 2021-05-11 18:25:55

1樓:biozzk

探針法螢光定量PCR檢測新冠病毒是傻瓜型的檢測方法,檢測人員只需取樣提取核酸,剩下的交給儀器裝置和設定好的反應程式即可。

有擴增曲線,就是陽性,沒有擴增曲線就是陰性,簡單直觀,判定明確。

而普通PCR做完之後,還需要跑膠,帶來了額外的操作,以及鑑定難度(比如非常弱的條帶,如何判定,似有似無的)。

不要以為檢測人員都是PCR專家,對於他們來說,越簡單越好,步驟多了,意味著操作出錯的風險越高。

所以,探針法定量PCR就成了檢測新冠病毒的首選。

2樓:

上面回答的都不太對,我直接說結論(此處說的螢光PCR是使用tagman探針,而不是SYBR GREEN):

1.特異性,普通PCR一對引物兩個位置匹配,螢光PCR多乙個探針,也就是說需要三個位置同時匹配,才可以出螢光,所以更準。

2.速度,普通PCR需要2.5個小時,跑膠體0.5個小時,不加準備時間都需要差不多3個小時,螢光PCR上機一般只要1.5個小時,速度會快很多。

3.準確性,跑膠染色後,是通過紫外或肉眼觀察,很容易忽略很弱的樣本,所以大概普通PCR至少需要1000個拷貝檢出來的話,螢光PCR可能只需要100個,大大的提高了檢出的可能性。另外普通PCR手工部分太多了,出錯的環節也增多,比如跑膠膠煮不透或使用兩步法,反覆開啟蓋子容易汙染會影響結果判斷。

隨便說一句,螢光PCR現在就是成本遠高於普通PCR,主要是tagman探針太貴了,也是國外壟斷的結果,小規模做實驗,引物也就幾十塊錢,而探針一般是一兩千塊錢。

另外高奔同志回答檢測下限和假陽性率的問題我覺得說反,螢光PCR與普通PCR相比,檢測下限只會更低,假陽性率也會更低,不知他是不是回答反了。

3樓:Pat

其它答案已經說的很好了。只是系統歸納一下。

PCR本身是一種擴增技術,並不包括檢測手段。因此一般還需要進行電泳分離後,通過染色來確定模板的量。但常規PCR因為很多原因是半定量,甚至只是定性的,無法根據PCR的結果相對精確地判斷模板的量。

其中原因之一是常規PCR在高迴圈數後,產物產量和模板量會脫離線性關係。在一般來說,PCR初始的幾個迴圈中,模板和產物的線性關係是最好的,但由於常規檢測手段的靈敏度無法檢測到相對較低的豐度,因此決定了常規PCR本身並不適用於定量檢測,尤其是低濃度的模板量。另外檢測速度也是考量的因素,常規PCR因為迴圈數較多,本身就需要更長的時間,此外還要再外加檢測的時間,使其更不適於即時需要結果的檢測。

螢光PCR就是解決這幾個問題,結合擴增和檢測,並通過提高檢測靈敏度,實現在早期的迴圈中檢測產物量,達到快速定量的效果。

但在開發階段,由於螢光PCR只能確定產物的量,無法區分產物是否唯一,因此常規PCR會被用於確認引物的特異性,以及選擇必需的對照引物及模板。不同的技術有各自的優缺點,會在不同的階段善加利用。

4樓:高奔

為了準確率,避免出現假陰假陽性結果。當然螢光定量PCR方法也有檢測限制:死體積(檢測下限)和假陽性率問題。

但是對於病毒感染,核酸檢測定量比不定量要強很多,對於臨床試驗而言,可以等段時間再重新檢測。

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