1樓：曉啦雞
一般qpcr和半定量pcr的引物是同乙個。用引物先跑半定量確定一下基因的表達是上調還是下調，然後才能跑qpcr來確定基因的更準確的表達量
2樓：看你走哪去
RT—PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）是將RNA的反轉錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈式擴增（PCR）相結合的技術。首先經BIOG反轉錄酶的作用，從RNA合成cDNA，再以cDNA為模板，在DNA聚合酶作用下擴增合成目的片段。RT—PCR技術靈敏而且用途廣泛，可用於檢測細胞中基因表達水平、細胞中RNA病毒的含量和直接轉殖特定基因的cDNA序列。
作為模板的RNA可以是總RNA、mRNA或體外轉錄的RNA產物。無論使用何種RNA，關鍵是確保RNA中無RNA酶和基因組DNA的汙染。用於反轉錄的引物可視實驗的具體情況選擇隨機引物、Oligo dT及基因特異性引物中的一種。
對於短的不具有髮夾結構的真核細胞mRNA，3種都可。
3樓：人之僵死
1.實時定量pcr引物務必要保證擴增效率，就是說每次擴增都是與理論值偏差不多的2倍擴增。所以正式實驗之前最好做引物效率測試，即以已知濃度稀釋樣品，觀察定量值是否與理論值相同。
在這方面要考慮引物本身的GC含量，PCR擴增片段的GC含量。此外，還要考慮擴增位置在cDNA上是否離polyA尾太遠，造成結果不穩定。考慮RNA不同剪下方式等等~~考慮off target，當然一般的off target都是可以通過溶解曲線看出來的，設計之前別忘了blast一下~~
2.我想你說的半定量是最後定條帶亮度吧，那麼你是沒有辦法精確確定引物擴增效率的。
具體取捨要根據你的實驗目的來哦~~~
4樓：lcy19712018
當然不同了。real-time引物短，一般100-200 bp左右，太長很浪費；普通PCR一般要在400多，太短容易和dimer分不開。具體設計要求也有差別，一般real-time引物設計都是通過軟體進行的，普通引物要求比較低。
5樓：春秋X-ray
沒做過半定量，一般螢光定量PCR測轉錄，都是相對定量，絕對定量需要有已知濃度的標準品。做基因合成和測轉錄引物不一樣，定量半定量應該沒區別，區別在於你是不是有標準曲線
螢光定量PCR是用來幹什麼的？
你好小仙女 在PCR反應體系中加入螢光基團，利用螢光訊號積累實時監測整個PCR程序，最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析。隨著PCR反應的進行，PCR反應產物不斷累計，螢光訊號強度也等比例增加。我們實驗室用BIOG PCR技術測得的擴增曲線起跳值一般在30左右，每經過乙個迴圈，收集乙個螢光強度訊號...
為什麼定量PCR的引物不可以使用RNA
PassionForLife PCR當然可以用RNA作為引物，事實上，我們自己的DNA複製很大程度上都是依靠RNA作為引物來實現的。回到你的問題，如果你的目的是為了定量，假設你的設想是完全正確，你的RNA引物切除酶每個擴增迴圈也只切你的RNA引物一次的話，這個也不能使定量更精確，你還是需要標準曲線來...
請問PCR跑出這種情況，應該怎麼解決
牛肉絲炒豬肉絲 你的問題都沒有描述清楚，怎麼幫你呢？你的實驗目的是什麼，是希望你要檢測的目的基因擴增出來還是擴增不出來 做基因表達抑制或者敲低的時候，Ct值是大比較好的 這個PCR裡面是擴增定量多少個基因 絕對定量還是相對定量 如果是擴增乙個基因的話，那理論上融曲應該是單峰，而你是雜，多個峰的說明擴...