pcr試劑盒裡到底有什麼?

時間 2021-10-26 21:04:34

1樓:唐寶寶

新冠核酸檢測採用QPCR,常見新冠核酸檢測試劑盒組分包括反應預混液(Buffer),酶預混液,陽性對照品、陰性質控品。 提取完後第一步配液分裝:按測試數將Buffer和酶混合配製成反應液,按1人份反應量分裝進PCR管/板中(部分預分裝試劑盒省略此步驟)。

第二步加樣:將樣本加入PCR管/板中,蓋蓋/封膜,混勻離心。第三步擴增:

按說明書程式設定,執行。第四步資料分析:設定閾值,按說明書確定本次實驗有效後,讀取每個樣本Ct值,一般Ct值小於說明書參考值的樣本為陽性,無Ct值的樣本為陰性。

2樓:

IVD從業者,我不做PCR試劑盒,培訓知道的。核酸檢測試劑盒叫螢光PCR探針法。試劑盒裡分好幾部分,最重要的是PCR反應體系:

DNA聚合酶,鎂離子,引物(新冠測2個基因和1個內標需要3對引物),探針(也要3對探針,發出三種波長的螢光),逆轉錄酶,dNTP(ATUCG會用部分U代替T),還有用於抗干擾的UDG酶(正常的DNA只有ATCG,PCR擴增出來的DNA會有AT(會用部分U代替T)CG,這樣擴增出來的DNA鏈中有U,UDG酶能切斷含U的DNA鏈,所以擴增DNA在空氣中形成的氣溶膠,不會影響其他樣本)、RNA酶抑制劑(空氣中液體裡全都是RNA酶,會降解病毒的RNA)、Taq酶的抗體(Hot start,常溫下能抑制Taq酶的活性,PCR擴增時高溫讓其失活,Taq酶就在高溫時恢復活性開始擴增了)。

還有陰陽性對照,陰性為水,陽性通常的合成的DNA,新冠的N基因和ORFlab基因和內標基因。

內標的作用通常為人的基因,所有的樣本結果內參基因有擴增曲線,否則無效。

反正流程:核酸提取,逆轉錄,cDNA高溫95℃變性(同時Taq酶的抗體失活),剩下變性到退火延伸很多次迴圈,最後就得到結果了。螢光PCR儀的作用在擴增的同時能夠監測探針的發光,得知擴增後DNA的量。

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