DNA連線酶有沒有專一性?不同黏性末端或者平末端是否能夠用同一種DNA連線酶?

時間 2021-05-06 00:16:50

1樓:昊睿

在基因工程中,要用同一種限制酶切割質粒和目的基因,讓它們產生相同的末端,後續相連線才能鹼基互補。

無論產生何種型別的末端(前提是質粒和目的基因要相同),用任何DNA連線酶都能連線。

2樓:翊生菌

情況一,題主的不同黏性末端指的是不同的酶(e.g BamHI和E.coRI)切了不同的片段,然後形成的BamHI黏性末端和E.

coRI黏性末端相連,那麼這種情況下,由於兩個酶切割造成的黏性末端是不一樣的(主要是缺口處序列不一樣,如果是同尾酶那麼另說),

BamHI 酶切位點

E.coRI 酶切位點

這個時候,一條鏈的缺口是GATCC(BamHI),此時它和另一條DNA上的缺口AATTC是沒有辦法連線的,因為這兩個序列沒辦法互補配對,所以DNA連線酶沒有辦法把他們連在一起。這個時候,不管你用任何連線酶,理論上都是不可能連上的,不存在專一性不專一性的問題。

情況二,題主的不同黏性末端指的是,兩個片段,一次實驗中都用BamHI切後進行連線,另一次實驗中都用E.coRI切過之後進行連線,在這兩種不同酶切的情況下,由於黏性末端是相互匹配的(都是用同乙個酶切的兩個片段),所以不管是第一次實驗,還是第二次實驗,那麼你用同樣的DNA連線酶,都可以連上,這裡可以說DNA連線酶是沒有專一性的,只要酶切位點匹配,就可以連線。

綜上,DNA連線酶能否將兩個片段連線在一起,取決於這兩個片段的黏性末端/平末端是否是互補配對的,而跟DNA連線酶的「專一性」沒有太大關係。如果題主做實驗多的話,就會知道,基本上做連線你就都是用那一管連線酶做。。不會出現說今天用了這個酶切就得換乙個連線酶用,明天用了不同的酶切又得換乙個連線酶用。

其實細心觀察一下自己實驗室裡,應該不難得出結論,如果是做基因工程,題主應該看不到專門針對某乙個黏性末端進行連線的連線酶。。。

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