DNA提取過程中,樣品提取液 SDS 氯仿異戊醇和冷乙醇的作用各是什麼?

時間 2021-06-09 14:39:50

1樓:實驗老司機

樣品提取液:一般是指商品化試劑盒裡的裂解緩衝液,裡面含有能輔助裂解細胞的成分。通常是一些離子去汙劑,例如SDS;或者胍鹽,例如鹽酸胍。

SDS:上面提到了,是一種離子去汙劑。作用原理是變性後的蛋白、細胞壁、基因組等大分子會聚合成乙個大分子複合物。SDS會和它們結合,並形成沉澱。

氯仿:通常和酚一起配合使用。它們倆都是非極性分子。

細胞裂解後的溶液裡面含有核酸與蛋白質,酚/氯仿會通過擠占蛋白質的位置,讓後者從溶液析出,形成沉澱。再加上酚/氯仿在溶液中比重較大,會沉入底部。於是就形成了溶液分層,上層為水和核酸,下層為氯仿和蛋白。

異戊醇:消泡的作用。使用酚/氯仿抽提核酸時,需要充分混勻溶液,來回搖晃數十次後,容易產生氣泡,氣泡不利於分子間相互作用。

使用一點異戊醇可以降低液體表面張力,這樣溶液中分子間相互作用就更加徹底有效了。

乙醇:洗滌核酸。乙醇會增加溶液中鹽離子的溶解度,讓最終獲得的核酸純度更高。

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