1樓：GraphPad
GraphPad知乎號在SnapGene的專欄裡分享過兩篇關於PCR的文章，希望對您有幫助！
GraphPad：SnapGene操作指南 | 聚合酶鏈式反應(PCR)
GraphPad：SnapGene操作指南 | 反向PCR
2樓：洞若觀火左丘明
先做個qPCR檢測目的基因表達量，(假設GAPDH的Ct=10)，如果目的基因Ct<25，才有較大概率P出來，否則很難。或者可以檢測一系列不同組織部位的表達量，找個表達量最高的部位做模板。
如果實在不行，要麼找人要，要麼找公司買cDNA，要麼找公司做全基因合成或者自己設計tiling引物做全基因拼接。
3樓：奇奇怪怪
換個RNA模板吧，取穗部的材料再反轉錄去擴PCR ，如果不區分發育時期話，取材也不麻煩；另外就是如果一直擴不出條帶也可能是參考序列有問題，做RACE重新確定下基因的編碼區；還有就是反轉的試劑盒不知道你們用的哪家，賽默飛的試劑盒SS3挺好，現在出到4了；反轉錄試劑盒還區分做qPCR和跑PCR的試劑盒，確認別買錯了；也有可能是擴片段的引物不好用；其實說來說去，最大的原因應該是取材不對，所以擴不出來。
4樓：黃鼠狼精Morrica
0. 無所謂，反轉時間很短，RNA降解基本可以忽略不計1.找乙個在這種物種中曾經能擴出來引物，比如找別人要個某個做內參基因的引物，看看能不能擴出來，驗證下反轉的結果。
2.（ 泰銖？100THB = 21RMB，感覺比國內還便宜啊。
話說 mix 可能是少數能實現試劑自由的了，我們都是一買一斤）看表達量，如果 RNA 的表達量本來很高，mix 沒問題；如果在這個組織中表達量很低，可能就得看命了（我也不知道多低，一般應該還是夠用的）。如果第一步確認反轉沒問題，可以用高保真酶試試，或者高保真酶乾到 35~40 個迴圈試試。
3.那個疑似目的帶，即使真是目的條帶，把溫度提高了不是更出不來了嗎？
4.推薦玄學解決方案（bushi
英語聽力簡單詞聽不出來是怎麼回事？
阿拉多 教你乙個方法。你第一遍先盲聽，看看能聽懂多少。第二遍遍看原文邊聽，仔細聽讀音，尤其是剛剛沒聽出來的那些詞彙。第三遍再盲聽，看看能聽懂多少。一直這樣迴圈直到每個詞彙都能聽懂。 榴蓮味的弄月 我覺得 第一，其實是因為有的時候背單詞不背音的問題，或者音沒讀準。你讀的不是這個音怎麼能指望聽出來這個音...
鋼琴的漸強漸弱老是做不出來，就是彈出來也特別平難聽。？
因為手指發力實際上是很難精細控制的。打個比方，國內的考級要求，其中音階的處理，其中音色強弱在比例上來說，國內百分95以上的人處理都是錯誤的。沒有見過任何強音記號，但是就是所有人都演奏的梆梆響，最後大部分考官或者是老師反倒以這種演奏體現了顆粒性把問題掩飾過去。很多曲子裡，有著在高速基礎上的音階，其音色...
有什麼文物是現在仿製不出來的？
老白 最大的難點不是仿製的出來與否，別抬槓哈，我說的是最大的難點。最大的難點是幾乎無法用古代工藝和技法仿製出來。人盡皆知的勾踐劍，你不用現代工藝來仿製下試試看。再比如，榫卯結構的木建築。再都沒有了。 天快亮了 很多造不出來的。許多任務藝失傳了，也就很難真正恢復了。其實，做舊只是讓人看不出來而已，時間...