剛復甦的細胞,培養幾天需要換液

時間 2021-10-29 20:15:38

1樓:

玄學一點地說,要看情況,不同細胞脾氣不同。建議看權威細胞庫的培養指南,比如ATCC或者中科院細胞庫cellbank。考慮換液週期之外還要同時考慮復甦時候的手法。

我的經驗是

1)細胞復甦時的密度,是否離心去除DMSO都會影響細胞復甦的比例;

有些分化程度比較低的細胞系(比如間充質幹細胞)不能太密,太密了容易分化成別的細胞,所以復甦這類細胞的時候要注意細胞密度。還有一些血液或淋巴系的癌細胞,懸浮生長,密度也是非常關鍵的。

標準凍存復甦操作是慢凍快化,37度水浴融化細胞懸液後,馬上加5-10杯體積的完全培養基,低速離心去除凍存液裡的DMSO,之後再用新鮮培養基重懸細胞,轉入皿或瓶裡培養。之後觀察細胞狀態,通常2-3天換液或者傳代。有時候犯懶,對一些比較皮實的細胞操作比較粗放,解凍後直接補新鮮培養基開始培養,過夜貼壁之後再換液。

也沒看到太大問題,但是不推薦。

2)培養基配方和細胞代謝特徵決定培養基pH值變化的速度。前面說了,2-3天的換液週期是比較常見的。但是,有些細胞代謝活躍或者代謝物裡有改變pH的物質,培養基變色特別快,這時候換液就需要比較頻。

遇到那種咋養培養基都不變色的細胞,或者你接種密度特別低(比如在做單轉殖培養),鏡檢細胞狀態允許的情況下,一周換一次也OK。

供參考。

2樓:六月的雪

目前最常用的細胞凍存液中DMSO和其它商用包括CELLERBANKER都對活體細胞有害,復甦的時候就應該多次使用PBS和培養基潤洗,最後再懸浮或貼壁培養,一般建議3-5天(按細胞傳代速率的大致一半來就好)換液(個人經驗,我養過白紋伊蚊和草地貪夜蛾細胞5-7天傳一次代)。

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