瓊脂糖凝膠電泳跑完,DNA條帶顏色淺怎麼回事?

時間 2021-05-05 18:58:55

1樓:Jane Li

膠濃度決定膠形成的內部孔徑大小,顯示為膠區分條帶大小的能力,和電泳速度

條帶顏色由加的核酸染色劑的量和實際產物的量決定

綜上,要麼膠配製有問題,要麼擴增不夠成功,還有就是凝膠緩衝液和電泳槽緩衝液離子濃度不匹配,也有一定影響

2樓:sunray

如果同濃度的膠下出現這樣的情況應該考慮是取樣的dna濃度不同的原因。如果是不同基因型可能是基因表達量不同,條帶很淺基因表達量低

3樓:

膠的問題樓上已經解釋的很詳盡了。乙個實驗室一般都會有自己配膠的習慣,可以請教師兄師姐,如果都這麼配其他人沒問題找找自己操作上的原因,比如熱膠沒熱透、放顯色劑時溫度太高什麼的。如果操作沒問題找DNA的原因,是否溫度不當、放置時間過長導致Dna降解,或者提質粒、酶切的時候操作不當導致DNA有問題。

做分子實驗如果有問題一定要理清思路有邏輯的進行分析,會少走許多彎路。

答完了才發現這問題多久遠,算了不刪了就這麼放著吧,說不定能幫到其他人。

4樓:天牛

一般情況下瓊脂糖的濃度對DNA條帶擴散濃度無影響,只會影響DNA分子「跑」的速度。據我導師的說法,要想跑完的條帶是平且亮的,就必須適當加大膠的濃度,同時適當減小電泳時的電壓。這裡的適當就要你自己把握了。

如果是聚丙烯醯胺凝膠的話,那麼情況就會複雜很多。與膠的乾淨程度,梳孔的平整程度,電解液TAE、TBE的濃度,電壓平穩程度等均有關係。

我本科是做植物的,估計跟你的生化有些區別,不過大體上是這樣沒錯。

附上兩張Juglans Mandshurica L.的全組基因(沒有點marker),同一居群的樣本差別這麼大,肯定是人為因素了。(我實驗室用EB做顯色劑)

5樓:來三虎

關係很簡單:就是用篩子過濾東西而已-----想想建築工地上工人篩沙子的大篦子。孔徑太大或太小都起不到過濾的作用!

條帶的問題要先看對照marker的條帶是否也是模糊瀰散狀。如果是marker的條帶壓的很好的話,說明膠的配製沒有問題,問題應該出在酶切環節。如果marker也是模糊瀰散,這首先看看marker是否過期等質量問題,如果marker沒有問題,就應該是膠配製的有問題了!!!

膠的配製絕對要用分子生物學級別的!!想當年跑2d膠還用過化學純的藥品,想想都不可思議盡然有這樣的boss!!

有關質粒瓊脂糖凝膠電泳圖分析?

marker就是這樣的好不啦,不是10000,7000,5000就得間距一樣,你的用的五千多bp的條帶沒有出來,而且有引物二聚體,沒有條帶可以先降低退火溫度,還是沒有,檢查模板是否有降解 可能性小 還是沒有,重新設計引物,擴增使用特異性高的熱啟動酶擴增,能夠避免引物二聚體,提高特異性 1.marke...

提取動物組織DNA跑瓊脂糖凝膠拖尾原因是什麼?

田梅 這個不算拖尾,只是有點小片段的瀰散,正常現象,影響不會太大。2000的marker還沒跑開,DNA也才離開膠孔一點點,電泳時間可以久一些。沒有明顯RNA亮帶,說明無RNA殘留。膠孔有點亮,可能是有少許蛋白質殘留。總體來說DNA質量還好。不過loading buffer是不是有點多,一般不是10...

瓊脂糖電泳 DNA拖尾,marker 也跑糊了 ?

tuannn 最近遇到類似情況。電壓120V,太大會跑不准。觀察marker要是跑不勻或位置不對或糊成一片,先重新配膠試試,如果沒改善,倒掉電泳槽的全部電泳液,重新配,再跑一次。我當時的問題是,片段化pcr後位置正常,純化後小片段沒了。本來要重做,還好組會和老闆溝通換了膠和電泳液。總結幾點要注意 膠...