1樓:tuannn
最近遇到類似情況。
電壓120V,太大會跑不准。
觀察marker要是跑不勻或位置不對或糊成一片,先重新配膠試試,如果沒改善,倒掉電泳槽的全部電泳液,重新配,再跑一次。我當時的問題是,片段化pcr後位置正常,純化後小片段沒了。本來要重做,還好組會和老闆溝通換了膠和電泳液。
總結幾點要注意:
膠要完全融;
電壓要穩,別為了快隨便加大;
60度左右溫度加dye,不能剛融好膠就加進去。加好dye立刻混勻;
如果電泳液是TAE差不多跑個三四次就該換了,TBE可以久一點;
如果成體系成批量出錯,不要過分懷疑自己的實驗手法,最好不要丟掉重做,先檢查上述簡單問題,以免無端浪費DNA還是找不出真正原因。
2樓:Mr.chang
兩種可能
1:膠沒融好
可以加熱至冒泡,然後取出搖勻。再加熱搖勻,反覆兩三次。直到充分溶解,溶液變透明。
2:電壓太大。
試著調低電壓,調低電流,加長時間。
3樓:
瓊脂糖沒有完全溶解就倒膠了,或者膠沒有完全凝固就上樣開始跑了,所以膠凝結不均勻,條帶當然不會很好看。看你的條帶形狀,感覺沒有完全溶解的可能性更大。
另外你這個拖尾有點厲害,是電壓加太高了嗎?
你膠也沒有放正,唉。。。
有關質粒瓊脂糖凝膠電泳圖分析?
marker就是這樣的好不啦,不是10000,7000,5000就得間距一樣,你的用的五千多bp的條帶沒有出來,而且有引物二聚體,沒有條帶可以先降低退火溫度,還是沒有,檢查模板是否有降解 可能性小 還是沒有,重新設計引物,擴增使用特異性高的熱啟動酶擴增,能夠避免引物二聚體,提高特異性 1.marke...
瓊脂糖凝膠電泳跑完,DNA條帶顏色淺怎麼回事?
Jane Li 膠濃度決定膠形成的內部孔徑大小,顯示為膠區分條帶大小的能力,和電泳速度 條帶顏色由加的核酸染色劑的量和實際產物的量決定 綜上,要麼膠配製有問題,要麼擴增不夠成功,還有就是凝膠緩衝液和電泳槽緩衝液離子濃度不匹配,也有一定影響 sunray 如果同濃度的膠下出現這樣的情況應該考慮是取樣的...
提取動物組織DNA跑瓊脂糖凝膠拖尾原因是什麼?
田梅 這個不算拖尾,只是有點小片段的瀰散,正常現象,影響不會太大。2000的marker還沒跑開,DNA也才離開膠孔一點點,電泳時間可以久一些。沒有明顯RNA亮帶,說明無RNA殘留。膠孔有點亮,可能是有少許蛋白質殘留。總體來說DNA質量還好。不過loading buffer是不是有點多,一般不是10...