瓊脂糖電泳 DNA拖尾,marker 也跑糊了 ?

時間 2021-06-03 01:51:58

1樓:tuannn

最近遇到類似情況。

電壓120V,太大會跑不准。

觀察marker要是跑不勻或位置不對或糊成一片,先重新配膠試試,如果沒改善,倒掉電泳槽的全部電泳液,重新配,再跑一次。我當時的問題是,片段化pcr後位置正常,純化後小片段沒了。本來要重做,還好組會和老闆溝通換了膠和電泳液。

總結幾點要注意:

膠要完全融;

電壓要穩,別為了快隨便加大;

60度左右溫度加dye,不能剛融好膠就加進去。加好dye立刻混勻;

如果電泳液是TAE差不多跑個三四次就該換了,TBE可以久一點;

如果成體系成批量出錯,不要過分懷疑自己的實驗手法,最好不要丟掉重做,先檢查上述簡單問題,以免無端浪費DNA還是找不出真正原因。

2樓:Mr.chang

兩種可能

1:膠沒融好

可以加熱至冒泡,然後取出搖勻。再加熱搖勻,反覆兩三次。直到充分溶解,溶液變透明。

2:電壓太大。

試著調低電壓,調低電流,加長時間。

3樓:

瓊脂糖沒有完全溶解就倒膠了,或者膠沒有完全凝固就上樣開始跑了,所以膠凝結不均勻,條帶當然不會很好看。看你的條帶形狀,感覺沒有完全溶解的可能性更大。

另外你這個拖尾有點厲害,是電壓加太高了嗎?

你膠也沒有放正,唉。。。

有關質粒瓊脂糖凝膠電泳圖分析?

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