提取動物組織DNA跑瓊脂糖凝膠拖尾原因是什麼?

時間 2021-06-09 15:33:00

1樓:田梅

這個不算拖尾,只是有點小片段的瀰散,正常現象,影響不會太大。2000的marker還沒跑開,DNA也才離開膠孔一點點,電泳時間可以久一些。

沒有明顯RNA亮帶,說明無RNA殘留。

膠孔有點亮,可能是有少許蛋白質殘留。

總體來說DNA質量還好。

不過loading buffer是不是有點多,一般不是10×或者6×麼,3微公升樣品加0.5~1微公升loading buffer差不多。

2樓:有滾滾兒不翻車

首先,題主提取DNA質量還好,若不是特殊要求,一般的擴增序列之類的實驗已經足夠了,但存在微量降解,可能在以下方面存在問題:

(1)電泳過程:從題主描述來看,膠圖顯示Marker 的100bp的條帶已經有明顯拖帶(糊了),說明電泳時間過長,可能造成很大程度的降解(我們實驗室一般用1.5%的膠,150V,5min左右就跑好了,用的Bio的電泳儀);

(2)樣品準備:研磨組織樣品時,速度要快,組織不能幹了(需要有液氮浸泡),樣品應避免反覆凍融;

(3)提取DNA:不同組織裂解時間不同,需要裂解充分;吸取含DNA的溶液時用力不要過猛,減少對DNA的機械損傷,提取過程不能劇烈震動。

3樓:安國大將軍

組織DNA這種,因為提取方式(高速離心)和跑膠(高電壓)的原因,極易產生機械損傷,而出現各種小片段,具體在膠上表現為各種拖尾

如果只是做普通PCR鑑定基因型之類,這種拖尾現象其實無大礙;如果對提取產物要求高,可用試劑盒除掉小片段

另外組織DNA往往都是非常大的片段(基因組),跑膠加marker我覺得沒啥意思

——一般我拿組織DNA提取產物去跑膠,就是看看有沒有提出東西來

本人以前跑的組織DNA提取產物,3μL樣+2μL lording buffer,1%瓊脂糖,150v,15min

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