1樓：牛肉絲炒豬肉絲
哪一種情況的結果不好？濃度低？260/280低於/高於1.8？還是260/230不正常？
菌量太大，裂解不充分？
加完S II間隔時間太長才加S III導致基因組被片段化而混到質粒裡面？
最後DNA沉澱之後，異丙醇或者70%乙醇洗完沒有晾乾導致鹽濃度過高，260/230偏低？
最後乙醇洗完晾太乾導致DNA重新溶解的時候不好溶？
溶解的TE buffer沒有預熱一下幫助溶解？
2樓：
什麼瓶子搖的？50ml的培養基如果是100ml的瓶子裡培養，大腸桿菌可能會缺氧長不好。
你搖多一點菌唄，拿250ml瓶子搖100ml菌過夜，菌體總質量上去了，質粒也會多一點。
3樓：實驗老司機
一般來說，如果這四十多種質粒都是高拷貝質粒的話，又都是同一批次處理的話，得率是相對穩定的。但如果是前面一批處理時都很順利，但突然後面就全部都不行的話。可以從以下2個步驟排除原因：
1 檢查質粒中提試劑盒：因為你說那不行的20來個質粒，用小提的話結果不錯，但換中提就不行。優先檢查buffer P2 是否有沉澱，室內氣溫降低時，這種緩衝液會析出沉澱，加熱後又會重新溶解，而這一步是裂解細菌，很關鍵。
2 如果1沒有問題，那麼重新挑菌落再搖菌，用搖出來的菌分別用小提、中提和新開一盒中提試劑盒各嘗試一次。如果小提和新的中提能做出來，那證明目前出問題的環節在這個舊的中提裡面，不知道什麼原因，總之不要再用；如果小提能做出來，但中提依舊結果不好，那應該是使用中提時出現了一些不規範的操作了。
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