能不能簡單的說一下PCR擴增技術是什麼呀

時間 2021-06-01 05:20:22

1樓:打錯了

以50衛生體系為例,需要的材料滅菌水,10×loading buffer,2.5毫摩Mdntps,模板,正向引物,反向引物,輔酶。按照體系配製三組擴增mix,標記組名,上機操作。

退火溫度根據gc含量決定。延伸時間根據擴增基因長度決定。反應結束後,取出樣品。

1微公升loading buffer和4微公升待測樣品充分,混合進行凝膠電泳檢測。實驗結果分析。

2樓:天空

簡單來說,DNA有幾個特點:

有兩條鏈(正鏈和負鏈)。

兩條鏈都是由A、T、C、G這四種「積木」拼起來的。

正鏈上的某個位置是A,負鏈上的同個位置就是T,正鏈上某個位置是C的話,負鏈上同個位置就是G,反之亦然。

正鏈和負鏈通過A和T、C和G的相互吸引形成穩定的雙螺旋結構。

在某個較高的溫度下,A-T和C-G的連線會被開啟,DNA會被解開成兩條單鏈,這個過程稱為變性。

溫度降低時兩條鏈會結合回去,稱為退火。

如果你想複製一條DNA,並且已經知道它的正鏈開頭的序列假設是AATTCCGGAGCTAGCT,你可以人工合成乙個對應互補序列的TTAAGGCC作為引物(假設,真實的操作沒這麼簡單),然後通過公升溫讓DNA變性,雙鏈開啟。此時你的人工引物因為比較短比較靈活就會結合到你知道的那條正鏈的開頭位置。這時候我們開始降溫,在降到某個溫度時,你在反應體系中預先加入的某個核酸酶會試著把你預先加好的A/T/C/G這些單個的「積木」連線到你的引物後面,如果連上去的「積木」能夠跟正鏈上的對應位置形成A-T或C-G的連線,酶就會繼續往下面拼積木,如果拼上去的積木是錯的,酶就把它切掉,換一塊積木重新拼上去…於是你的引物慢慢就在酶的作用下延伸成了和正鏈相對應的負鏈。

實際操作中,我們會設計一對引物,分別和要複製的DNA兩條鏈的一端互補,這樣,在上述的公升溫變性→退火延伸的過程中,乙個DNA的兩條鏈就被開啟,並且分別和乙個引物形成了新的DNA。接下來我們再來一次公升溫變性→退火延伸,於是兩個DNA都開啟並且形成了四個新的DNA。這樣的迴圈重複20次,乙個DNA理論上就能被擴增(2的20次方)倍。

3樓:雪鳶yukitobi

超簡單講一下。

就是乙個機器,你往裡面加入

1.設計引物(方便脫氧核苷酸連線上去)

2.耐熱DNA聚合酶

3.四種原料(A,T,C,G)

然後你就可以在那個機器上設計好你要的過程然後等著就好了。

第一步,高溫變性。

高溫使DNA解旋,因此無需DNA解旋酶(而且這種酶不耐熱)。

第二步,延伸。

四種原料嚴格遵守鹼基互補配對原則在設計引物上延伸。

第三步,復性。

低溫使DNA可以自發的復性為雙鏈。

重複上述步驟n次,DNA會以指數函式的變化迅速擴增,若加入兩個設計引物,所得DNA的個數為2的n次方個。

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