1樓：數星星的青蛙
前面的回答都差不多了，我幫著捋一捋。第一肯定是要找著你所說的這個基因的CDS序列.根據序列確定sgRNA,這個過程中要注意兩點：
1，你的sgRNA要盡量靠近起始密碼子2，你設計的的sgRNA盡量不要有脫靶位點。其次就是構建相應的Cas9表達載體，常用的就是330 458 459這些，測序做好驗證。最後就是在細胞層面的表達和單轉殖細胞系獲得及驗證了。
一般驗證就是利用錯配酶和測序來確定有沒有DSBs的發生，拿到單轉殖細胞系再測個序就拉倒。
2樓：科科
如果把人類替換成老鼠。
改進的話也就是把暴力基因敲掉。在不考慮暴力基因對其他功能的影響下，可以用cas9/sgRNA進行敲除試驗。當然，用CRISPR在老鼠裡進行敲除的方法有很多，這裡選取乙個，即下圖中(右側)的方法。
首先設計好對應暴力基因的sgRNA，將其連線進入圖中pX330質粒中BbsI的位置，之後可以直接將DNA或者RNA打入進受精卵，再將受精卵移植到母老鼠的體內。等待其生出小老鼠之後，將小老鼠們進行CRISPR基因型測試，基因型測試方法可如下圖。
這個測試是基於 Cas9/sgRNA將目標基因進行DSB之後使其進行NHEJ而引入突變的原理，傳統PCR基因型測試測不出來。
（但是如果你設計兩條sgRNA，就有兩個DSB在一條基因上，那麼剛好可以使得中間的那段減出去，就能得到一段Deletion，如果是基於這個原理的話，傳統的PCR基因型測試就可以。）
Reference
Asian J Androl. 2015 Jul-Aug; 17(4): 623–627.
CRISPR 101: Validating Your Genome Edit
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