1樓：
我覺得首先得有陽性對照。第一就是證明一抗沒有問題的陽性對照，找乙個一抗說明書上的細胞作為陽性對照，這可以來檢驗一抗是不是起作用，也要看看actin等內參蛋白是否有條帶，證明你的蛋白上樣是不是有問題，還要看看說明書上的一抗稀釋比例；第二就是二抗要看仔細（別問我是怎麼知道的），比如山羊抗兔對應的是兔的一抗、兔抗山羊對應的是羊的一抗。
個人覺得western要注意的細節比較多，從配膠開始別有氣泡、電泳時電極弄對，轉膜的時候黑膠白膜、放夾子時顏色也對應好、槽子裡放一塊小冰袋防止蛋白降解、轉膜時電極也要對應好，找個大冰盒把槽子放在裡面，再放上冰，這樣轉膜也是為了防止蛋白降解。轉膜時間要根據你的蛋白大小定，一般是2~2.5h。
最後祝題主實驗順利~
2樓：科研菜鳥
請教離你最近的師兄師姐。wb沒有條帶原因太多。第一，考染是否有條帶。
第二，怎麼證明一抗二抗沒有問題？有陽性對照？第三什麼樣品？
什麼抗體？還有轉膜啊各種問題。還是請教身邊的師兄師姐吧。
也不用著急。給個建議，這種實驗問題應該是請教師兄師姐，而不是來知乎，回答起來非常困難。
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