1樓：放電的毛衣
首先是空載質粒（我們稱之為Back Bone），與目的基因用相同的酶切（一般來說37℃數十分鐘至數個小時），那麼這樣就會有相同的粘性末端。
然後用T4DNA連線酶（或者其他粘性末端連線酶）連線，一般來說是先退火，再PCR，最後再連線。
再然後就是轉化，熱激感受態細胞和連線後的產物，一般來說這時候有幾種情況，空載的，只有目的基因的，只有質粒的，有目的基因和質粒（未連線），連線有目的基因的質粒。
因此，接著就通過接菌進行篩選，Back Bone上面有特定的抗性基因，能夠把轉進去的連線有目的基因或者自連的質粒篩選出來，其餘的都被殺死了。（步驟是，擴大菌落，塗平板，挑菌繼續搖菌）
這個時候，提質粒跑PCR，第一次你可以試著菌落PCR，根據你的目的基因和Back Bone的大小，進行乙個粗略的判斷。更加精確的判斷，則是要進行測序。
測序結果對了，沒有點突啥的話，就得到了含有目的基因質粒的菌落了，你可以保菌備用。
（以上就是常見的分子生物學操作，你看懂了以後，大概就能明白你的問題了。）
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