骨髓配型的吻合機率是如何計算的？

1樓：殷曉波

骨髓配型做的是 HLA 分型檢測，分初配和高配兩種。親緣和非親緣是有區別的，沁源的只用做六位點初配，非親緣的需要做十位點的高配。

六位點初配檢測的是 HLA-A、HLA-B、HLA-DR 這三組序列的六個位點。這六個位點遺傳自我們的父母，正常情況下，從父母那裡各得到三個位點，所以，子女與父母的 HLA 分型結果都是半相合。

非親緣除了要做上述六個位點的檢測以外，還要做 HLA-C、HLA-DQ 的四個位點的高配。

現在 HLA 分型檢測採用的是 PCR-SSP 技術，檢測只需採取幾毫公升的外周血。

「PCR 序列特異性引物（sequence specific primer,SSP）分析法是使用能夠特異識別特定等位基因的引物通過PCR擴增檢測序列多型性的方法，也稱作等位基因特異性引物PCR 法。本實驗是應用PCR-SSP 法檢測MN 基因型。

實驗原理

根據決定某等位基因的鹼基性質，設計3′端第乙個鹼基分別與各等位基因的特異性鹼基相匹配的序列特異性引物，在PCR反應過程中，只有引物3′端第乙個鹼基與決定特定等位基因的鹼基互補時才能實現DNA 片段的完全複製，根據PCR 產物的有無進行等位基因的分型。

實驗器材

PCR 擴增儀、電泳儀、電泳槽。

實驗試劑

引物1：5′-GCATCAAGTACCACTGGT-3′；引物2：5′-GCATTAAGTACCACTGAG-3′；共通引物：

5′-GAGAAGTTGAGAAAGGGGT-3′。模板DNA、Taq 聚合酶、丙烯醯胺、電極緩衝液、上樣緩衝液等

實驗方法

1. PCR擴增PCR反應體系為20μl（2個體系，分別為引物1和引物2），含模板2μl(約50ng)，引物各1.5μl,dNTP1.

6μl(0.4mM)，10×Buffer緩衝液2μl，Taq酶1.0U，加雙蒸水至20.

0μl；PCR反應條件為94℃4min,94℃1.5min/52℃2.0min/72℃2.

0min，30個迴圈。

2. PCR 擴增產物的檢測取PCR擴增產物2μl，6%聚丙烯醯胺凝膠電泳（T=6%，C=3.3%，凝膠規格為82mm×64mm×0.

75mm）。電極緩衝液為1×TBE。將加有1/5體積上樣緩衝液的酶切產物電泳，220 v 電壓，電泳2－3h。

銀染顯色。」

【上述有關 PCR-SSP 的內容引自《PCR-SSP 分析實驗原理和步驟》】

圖為乙份親緣六位點全相合的 HLA 分型檢測報告。