1樓：
引物不合適，酶不合適，條件不合適，從圖上我只能感覺模板量太多了，我能看到基因組條帶，當然我不知道你上樣了多少。
同學，提問時你應該自己先排除一些問題再來問，比如你確定條件沒錯操作沒問題啥的。
2樓：
這麼明顯的引物二聚體，說明酶 dNTP buffer等都加了，這些一般沒什麼問題，排除。
做pcr加的也就這麼幾個東西，很明顯是引物不特異或者模板不對。
解決方法
1.換模板重p。模板要麼加錯了，濃度太高或者太低了，要麼降解了2.針對你的模板重新設計引物，最好設計簡併引物
3樓：
除marker之外亮的部分是引物二聚體。
作為昔日的pcr磚工，按我的經驗來看，這種豪無smear的條帶應該是啥都沒p出來。
下面你需要檢查幾個部分：
1. 酶和buffer是否過期or配套（聽起來很荒謬，但這是很多人都會犯的錯誤）
2. 檢查引物與模版是否正確……（嗯、根本問題不能錯，尤其是右端引物在設計時有沒有反向互補，推薦傻瓜軟體snapgene）
3. 檢查模板量是否過量，模板過多會導致無法p出來，建議將模板進行10的梯度稀釋，做梯度pcr
3. 檢查引物的結構，ncbi中有相關的工具，雖然我的經驗是不論結構多差只要和模板有10bp以上的重複序列都能p出來。
4. 上述都確定完沒問題依然p不出來請降低退火溫度，嘗試進行溫度梯度pcr。
5. 加少量鎂離子
6. 最後不行的話……把taq換成primestar吧……高保真酶，貴，好用。taq酶p不出來的很多奇怪的序列primestar一上就靈……
最後，你加反應體系的時候攪勻離心了麼……暴力實驗的時候我會拿槍頭進去攪攪…防止酶和dntp分布不均……
這個問題為什麼會出現在我的時間線上呢？我為什麼會來回答呢？我明明已經……
4樓：劉秸稈
你要看看
你pcr之前
是不是沒離心
哈哈哈哈哈哈哈哈哈哈哈哈哈哈哈哈哈哈哈哈哈哈（苦笑）抖機靈（其實也不算）完畢
1.看看模板引物加沒加錯，酶以及體系其他成分加沒加錯2.都沒問題的話嘗試降低退火溫度。實在p不出來降到55℃到50℃都可以試試
5樓：夜神K2
從基因組P還是從質粒P？marker是啥？目標片段多大？
上面有一條暗暗的窄帶，是模板還是產物？如果是（切開的）質粒或者固定長度的大模板好理解，如果是基因組模板未免也太窄了，看你把marker的條帶跑的這麼寫意不感覺那麼整齊的窄帶是基因組dna。 PS，看上去marker那條帶也有這個，是不是啥玩意兒汙染了？
引物是固定的還是簡併的？根據保守序列、二聚體什麼的專門設計過麼？是不是說確定可以p出來？模板有沒有測過序？把兩邊引物往外擴一段、改改反應引數試試？
模板dna質量很好麼，沒有碎掉、沒有離子汙染什麼的？引物質量沒問題？酶、緩衝液、水、etc都是好的？PCR儀是好的？放倆陽性對照看看啊
少年想解決問題要多給點資訊啊……
6樓：夏牧
引物問題，我遇到過類似情況
前面部分都是用的新訂引物，最後面七個重複試驗仍舊用的舊引物與前面七個DNA模板一樣，其他條件也一樣。 結果差異很大
7樓：雨花
從最底部的引物條帶看確實是加了引物的，但是要麼反應掛了，要麼產物就是上面沒跑下來的那個超大片段。
首先普及一下實驗常規，PCR圖譜應該標好上樣樣品名、marker大小、目標條帶大小、日期，操作者名字。其次如果沒有你要的產物，檢查模板、引物和酶有沒有用對，最後調整條件重試
(這還是前不久的一道面試題.....)
跑完馬拉松應該如何做賽後的恢復？
三瘋貓 其實這裡分兩種情況來恢復 1 可以通過吃吃喝喝睡睡來恢復，在自身覺得沒有完全恢復之前不考慮跑或者其他方式恢復 2 通過慢跑或者游泳的方式來進行恢復 關雅荻 吃飽了睡，睡飽了吃。迴圈幾遍，直到精神滿血復活。這幾年，無論多麼難，距離多麼長的比賽，賽後就是堅定的執行這幾個字，恢復效率最快。我就不扯...
我是做不幹膠標籤的，但我對這個行業很想聽聽你的意見！？
不管什麼行業，其實要做好都不容易。本人從事不幹膠也有些年頭了，感覺各行各業都有一定的共通性。最重要的還是要維護好老客戶，我們公司有三家做了11年的老客戶，說起來簡單，要做好真的不容易，但是只要用心，真誠，把客戶的事都當成自己的重要事情來辦就能成。不過不幹膠這行最難的還是開拓新客戶，競爭大，網上鋪天蓋...
一千公尺我現在只能五分四十，跑完累的要死，是真的要死，問一下各位怎麼練習能跑進四分半，只有乙個月時間
鹹 魚 經常跑，每次試著套整呼吸跑，每次跑完整一千，最後三百公尺持續加速，盡量每次把自己跑的渾身難受或者腦缺氧 本人每次都這麼跑，後面成績都是在腦缺氧裡提高的 成教練 我剛剛寫了一篇文章，給乙個人解答了，我我說一下我帶體測學員情況。訓練最忌諱的就是不上不上，不快也不慢，每次跑不是全力但也不慢，每次跑...