原核生物的mRNA怎麼提取?

時間 2021-10-29 17:18:58

1樓:

要提取原核生物的mRNA首先要提取原核生物的總RNA,原核生物有細胞壁,需要先破壁,使細胞中的RNA暴露出來,再將總RNA分離出來。真核生物的mRNA中帶有一段poly(A),可使用帶有oligoT的磁珠將其捕獲;而分離原核生物的mRNA則需要通過rRNA去除的方法去分離原核生物的mRNA。

—來自易基因的回答

2樓:科研小白a

大多數真核細胞mRNA的3』端通常具有由20-30個腺苷酸組成的polyA尾巴,寡聚胸腺嘧啶脫氧核醣核苷(OligoT)可以與之配對結合,這就是提取mRNA最基本的原理.具體到實驗手段上,常見有磁珠法、纖維素柱層析法等。

磁珠法一般是用生物素標記OligoT,親和素標記磁珠(生物素和親和素間具有高度親和力).實驗時生物素標記的OligoT與mRNA的polyA高效雜交形成複合體,此複合體又與標有親和素的磁珠結合.用磁性分離架就可以將這堆複合物分離出來.

最後用無RNase去離子水將mRNA從複合物中洗脫下來即可.

寡聚dT纖維素柱層析法的大致流程:總RNA流經寡聚dT纖維素柱時,在高鹽緩衝液中,帶polyA尾的mRNA被特異地結合在柱上.降低鹽濃度,mRNA被洗脫.

一般過兩次柱後,就可得到較高純度的mRNA.

當然有些mRNA沒有polyA尾巴,如原核生物,可通過消化周圍的其他RNA來提取,.若是不必分離mRNA的,設計好引物就也有的用總RNA做。

--from易基因科技

3樓:霧裡看霧

原核生物不和真核細胞的mRNA分子一樣,不具有最顯著的結構特徵具有3'端的Poly(A)尾巴。故而不能利用mRNA3'未端含有Poly(A+)的特點,只能通過消化周圍的其他RNA.

----來自易基因

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