CRISPR Cas9敲掉基因之後會去哪?

時間 2021-05-07 20:11:34

1樓:源井生物

CRSPR-Cas9完成任務之後會去哪兒,其實取決於你使用什麼方法將它們轉進去。如果用慢病毒法或其他穩轉法,那它們則會隨機整合在基因組裡。如果使用瞬轉法,那它們完成了工作後,經歷幾次傳代之後,它們就會丟失了

2樓:青墨雨

編碼「剪刀」的基因其實一直會在。

剪刀說就是乙個蛋白質CRISPR-Cas9蛋白,現在的改造一般是會用特異的啟動子來啟動這個剪刀的表達,比如只在胚胎時期表達的啟動子來啟動Cas9表達,當樣本長大,不再是胚胎的時期,這個Cas9蛋白就不表達了。

Cas9編輯基因是需要通過乙個嚮導RNA來定位到具體基因的,理論上這個被靶標的基因被剪輯掉後,就靶向不到了,所以不會編輯其他的基因。

但是Cas9的脫靶效應一直存在,雖然通過不斷優化,但還沒有研究成果表明,可以做到完全不脫靶。脫靶效應就是說,我本來設計的嚮導RNA是靶向A基因的,但由於未知的潛在的原因,X Y Z基因也不小心被編輯了。而且目前的研究表明,這種脫靶還是隨機的。

3樓:小鬼星雲

題主可以去看一下Crispr/Cas9的原理

基因編輯具體怎麼操作的呢?

一套Cas9只能切除乙個位點,所以切除乙個片段,需要使用兩次Cas9,而這兩次切除往往是同時進行的,使用的Pam往往只有幾個鹼基,構造起來十分簡便。ABC中切除了B,細胞會自動把AC連起來,有兩種實現這樣的連線的修復機制。至於被移除的B以及完成了任務的Cas9,此後就不用再管,因為它會被降解。

而它一般不會被用來測序,因為有專門的辦法。就像shotgun(鳥槍)法基於Sample(沒記錯是叫這個吧??),是直接把染色體轟成小段然後乙個接乙個地測序,shotgun可以批量測序。

還有人工染色體(AC)都無需打斷,直接搞個載體就行了。HGP用的就是這個

為什麼CRISPR Cas9容易脫靶?

源井生物 脫靶的產生是因為gRNA識別錯了的鹼基序列。容易脫靶應該是設計的gRNA不好,打靶到了別的同源區。其實在gRNA設計階段就可以很大一部分的脫靶可能性。再配以後期陽性轉殖的高危位點測序脫靶分析,可以將CRISPR的脫靶效應控制的很好。 百瑞生物科研團隊 博主你好!Crispr cas9的是目...

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