載體上His標籤加在C端還是N端,有什麼區別?

時間 2021-06-16 19:55:25

1樓:syttdll

1、純化標籤在N端,純化時所有表達出純化標籤的都可以掛在純化柱上。純化標籤在C端,純化時只有目的蛋白表達完全又能表達出純化標籤的才可以掛在純化柱上。蛋白表達中途截止的就沒有純化標籤也就掛不到柱子上。

這也是N端比C端純化出來的蛋白量高的原因。

2、對於比較難表達和蛋白太小容易被降解的蛋白,可以加在N端,可以保證蛋白的穩定性,同時不會對外源蛋白免疫原性造成較大影響,適用於表位篩選。如果搭建的是分泌蛋白,裝在N端,蛋白N端的訊號肽會被酶切掉,這個時候適合加在C端。

3、各種菌株的表達差異,不同的轉殖之間的表達量差異也挺大。很多時候蛋白用哪個好,多做做預試驗還是必要的。

2樓:容謹

沒有區別,問題是會不會影響你想要表逹的蛋白質的功能,畢竟His-tag是會跟你的蛋白質融合在一起。 N端來說一般比較好,但還是要看蛋白質的結構和功能結構域 (Functional domain)在那。個人經驗是若不肯定那端比較好的話,兩端都做,但兩端都不行的例子也是有的,這情形無解。

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