1樓：瑞源生物
雙分子螢光互補 (BiFC)是一項可直觀、快速判斷目標蛋白在活細胞中的定位和相互作用的新技術。該技術利用在螢光蛋白特定位點插入外源片段而不影響GFP螢光活性的特性，在其分割為兩個無螢光活性的蛋白片段, 即N端片段（N-fragment）和C端片段（C-fragment），當能夠發生相互作用的兩個蛋白分別與N端片段和C端片段連線形成融合蛋白並在活細胞中共同表達時, 螢光蛋白的N端片段與C端片段就能夠相互靠近, 重新形成活性的螢光基團而發出螢光。
雙分子螢光互補系統
1. YFP普通型：
該系統適合蛋白相互作用較強的蛋白互作研究，YFP螢光強度控制在較低的水平，不受背景等因素干擾。
2. YFP增強型：
該系統適合膜蛋白互作等蛋白之間相互作用較弱的蛋白互作研究，YFPn和YFPc經過人工編輯，YFP螢光增強，便於觀察互作弱的螢光訊號。同時對206位氨基酸A進行突變成K，降低了背景等因素干擾，結果真實可靠。
流程
1.構建包含目的蛋白的質粒；
需客戶確認目的蛋白在螢光蛋白的N端還是C端。
2.重組目的質粒轉化農桿菌；
3.農桿菌菌液注射菸草葉片；
4.共聚焦顯微鏡觀察和拍照。
結果如下：
實驗目的：通過BIFC實驗驗證A、B蛋白能相互作用。
實驗設計:
A：(GFP組) pCAMBIA1300-35S-GFP(GFP)
B：(陽性組) pCAMBIA1300-35S-YN173-P1(YN173-P1) + pCAMBIA1300-35S-YC155-P2(YC155-P2)
C：(陰性組) pCAMBIA1300-35S-YN173(YN173) +pCAMBIA1300-35S-YC155(YC155)
D：(實驗組) pCAMBIA1300-35S-YN173-A(YN173-A)+pCAMBIA1300-35S-YC155-B(YC155-B)
E：(陰性組) pCAMBIA1300-35S-YN173-A(YN173-A)+pCAMBIA1300-35S-YC155(YC155)
F：(陰性組) pCAMBIA1300-35S-YN173(YN173)+pCAMBIA1300-35S-YC155-B(YC155-B)
如圖所示，GFP蛋白正常表達，有螢光訊號；陽性對照組有螢光訊號；陰性對照組均沒有螢光訊號；YN173-A與YC155-B共轉染後，能明顯觀察到螢光，由此可知A蛋白與B蛋白存在互作。
詳情可看以下了解
雙分子螢光互補BiFC技術服務-瑞源生物
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