1樓:陸飛
Pcr加樣其實不重要,加到管壁上也行直接加到液面下也可,關鍵是離心。少量氣泡可以稍微彈一彈氣泡就破了,再低轉速瞬時離心一下即可(千萬別太久,速度別太快,否則可能分層)
2樓:Exon 外顯子
1) 避免出現氣泡的方法:
握槍的手要穩,如果乙隻手實在很抖,建議雙手持槍。
加入液體後,直到將槍頭提到與液面相切處,再鬆手。
2) 去掉氣泡的方法:(以下方法可能引入雜質,但對分光光度測量結果的影響一般可以忽略不計)
使用移液槍反覆吹打。
用最小號的槍頭粘一點點無水乙醇,輕輕戳掉氣泡。(無水乙醇充當表面活性劑)
用自動鉛筆芯(也可粘乙醇)戳掉氣泡。
實在沒辦法了,拔一根頭髮下來,戳掉氣泡。(身體表面油脂充當表面活性劑;還是怕引入外來 DNA,故 PCR 實驗不推薦此法)
以上方法均親測有效。
3樓:實驗老司機
為了對Taq酶起保護作用,PCR使用的酶液中含有甘油,因此容易產生氣泡。
不同廠家的酶液中甘油水平不同,所以產生氣泡的程度也不一樣,但產生氣泡本身是很難避免的。
通常一些操作細節,比如吹打混勻的速度太快會更容易產生氣泡。我們可以在操作上減少氣泡的產生,比如說我們先把酶液,引物,dna模板加到96孔板的孔道內壁不同位置上,而不直接加到底部。全部加完後,輕微離心甩到底部。
然後低速度渦旋振盪之後,再離心1分鐘。
只要操作熟練,一般不會產生大量氣泡。少量的氣泡可以通過用手指輕彈幾下管底去除
4樓:知豆
(1)移液槍槍頭貼中下部管壁上
(2)移液槍一級打下樣品,不要用二檔
(3)避免吹打移出的樣品
移液完後輕輕敲動一下96孔板,不能使太大力,力度太大液體容易濺出。如此操作樣品幾乎不會出現氣泡
5樓:beard
是否容易出現氣泡,取決於所處理的樣品的性質,一般蛋白類物質或者粘度較高的物質確實容易在加樣或吸取中出現氣泡。以我個人的經驗,最重要的技巧就是慢,在吸採樣品的時候要十分緩慢,保證沒有氣泡被吸入。其次在推擠出樣品的時候,不要一推到底,因為一推到底很容易將液體全部推擠出後,又多推出一部分空氣,這部分空氣很容易被推入液體中,從而出現難以消解的氣泡。
因此,只要推到將全部液體都排出的程度即可,盡可能防止空推(即防止擠出空氣)。
如果操作不慎還是出現氣泡,可以採用離心操作,看能否消除氣泡。
如果以上操作還是不能解決問題,可以看看能否在加樣品前,先稀釋樣品的濃度,然後相應增加樣品的體積,以保證體系中樣品濃度一致。因為一般粘度高,容易產生氣泡的物質,其氣泡性會隨濃度的降低而降低。
6樓:白甫頌
不知道你是做什麼實驗呢?
如果是一般實驗只要慢吸快打,加到管壁上進行離心即可。
如果沒有專用的96孔離心機,那麼可以自製乙個甩動式的土製離心機,具體方法就是利用黃色的200ul板子,在四邊綁上繩子,上面集束。離心時,將96孔板置於其上進行畫圓甩動即可。
如果是加入濃稠物質時,比如細胞或者菌體,盡量先加濃稠物,且盡量貼近管底,但不要接觸管底,貼壁加入,隨後離心。
如後加濃稠物,根據加入液體量需要調整高度,依然貼壁加入,使得加入物質成滴時剛好可以與液面接觸,隨後離心。
生物實驗主要就是就是考慮解決辦法和經驗的積累,慢慢就會得心應手了,祝你好運!